Oocyte被“激活”了嗎？

卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）借助顯微注射系統(tǒng)直接將精子注射到卵泡漿內(nèi)，繞過(guò)了常規(guī)IVF精子與透明帶的結(jié)合、頂體反應(yīng)、精子與卵細(xì)胞膜的融合等來(lái)實(shí)現(xiàn)受精的過(guò)程。在臨床實(shí)際應(yīng)用中，選擇ICSI受精能提高受精率和降低異常受精率。然而臨床統(tǒng)計(jì)分析表明仍有1%～3%的ICSI周期會(huì)發(fā)生受精率低下或者完全受精失敗。ICSI受精失敗的原因有很多方面，其主要原因在于卵母細(xì)胞激活不足，而導(dǎo)致卵母細(xì)胞激活失敗的首要原因在于精子缺陷和遺傳學(xué)因素等。

如何避免患者ICSI后卵母細(xì)胞激活失敗，從而得到更多的受精卵和優(yōu)質(zhì)胚胎，最終獲得妊娠并出生健康嬰兒，最大可能減輕其精神心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)仍是目前ART面臨的挑戰(zhàn)。卵子人工輔助激活（assist oocyte activation, AOA)即通過(guò)人工誘導(dǎo)模擬精子引發(fā)的鈣離子震蕩，可以有效彌補(bǔ)精卵結(jié)合時(shí)的卵子激活缺陷，誘導(dǎo)減數(shù)分裂正常進(jìn)行、雌雄原核的形成，幫助卵子啟動(dòng)胚胎發(fā)育，從而完成受精。對(duì)于ICSI受精失敗患者通?？梢越柚鶤OA有效地克服因卵母細(xì)胞激活不足引起的受精失敗或受精率低，并能獲得正常發(fā)育的胚胎。

在人類(lèi)輔助生殖治療中使用了多種人工激活方法，包括機(jī)械、物理或化學(xué)刺激，它們會(huì)引起卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的一種或多種鈣升高，卵母細(xì)胞胞質(zhì)中游離鈣的升高是受精過(guò)程中啟動(dòng)卵子激活的一個(gè)重要因素。

人體內(nèi)的機(jī)械 AOA 可以通過(guò)在 ICSI 程序中破壞質(zhì)膜并進(jìn)行的細(xì)胞質(zhì)抽吸來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的大力抽吸可能會(huì)增加注射時(shí)卵母細(xì)胞的鈣負(fù)荷，可以使注射的精子頭部與卵母細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)鈣儲(chǔ)存建立更緊密的接觸，從而導(dǎo)致更高的受精率。有臨床中心數(shù)據(jù)顯示，ICSI過(guò)程中反復(fù)抽吸卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)可以提高卵母細(xì)胞的受精率，然而不提高胚胎可用率。ICSI過(guò)程反復(fù)抽吸，可能會(huì)對(duì)卵母細(xì)胞造成損傷，引起凋亡。因此在ICSI過(guò)程中要注意抽吸的力度，以免損傷卵母細(xì)胞。

最流行的物理刺激 AOA 是電激活，它通過(guò)在質(zhì)膜中形成孔來(lái)誘導(dǎo)鈣流入。直流電壓產(chǎn)生的電場(chǎng)使細(xì)胞膜脂雙層中的帶電蛋白質(zhì)移動(dòng)，從而在膜中形成孔。培養(yǎng)基中的細(xì)胞外鈣通過(guò)這些孔流入卵母細(xì)胞，瞬時(shí)升高內(nèi)部鈣濃度并激活卵母細(xì)胞。電刺激中的電脈沖受脈沖強(qiáng)度、寬度、時(shí)間等因素的影響，如果脈沖時(shí)程過(guò)長(zhǎng)或場(chǎng)強(qiáng)過(guò)高，則導(dǎo)致卵母細(xì)胞退化、死亡增多。電激活需要電融合儀，因此在臨床上的應(yīng)用較少，主要用于獲得孤雌生殖哺乳動(dòng)物胚胎，也是體細(xì)胞核移植后的關(guān)鍵步驟之一，可作為研究早期胚胎發(fā)生過(guò)程中生化和形態(tài)學(xué)事件的模型。

化學(xué)刺激AOA在人類(lèi)輔助生殖中最為常用的卵子人工激活方式，其激活劑主要包括鈣離子載體A23187，離子霉素、氯化鍶及氯化鈣等。離子載體是一種脂溶性分子，可將離子轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)細(xì)胞膜的脂雙層，從而使細(xì)胞外鈣流入細(xì)胞。鈣離子載體通過(guò)增加細(xì)胞膜的鈣滲透性來(lái)幫助激活卵母細(xì)胞。鈣離子載體A23187的AOA不僅提高ICSI受精失敗或受精低下患者的受精率，還可以提高胚胎的卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率。

AOA 的目標(biāo)是盡可能地模擬哺乳動(dòng)物受精過(guò)程中看到的生理鈣變化，因此AOA 是一種高度專(zhuān)業(yè)化的受精技術(shù)，當(dāng)傳統(tǒng)的 ICSI 無(wú)法激活人類(lèi)卵母細(xì)胞時(shí)，可能會(huì)應(yīng)用它。卵母細(xì)胞激活是人類(lèi)發(fā)育的最早事件，在這個(gè)生命的關(guān)鍵階段，任何輕微或重大的不良事件都可能對(duì)單個(gè)器官和/或整個(gè)人體的功能產(chǎn)生長(zhǎng)期或持久的影響。有兩項(xiàng)研究隨訪分析了AOA后出生的共43名兒童，結(jié)果表明AOA 出生的兒童在產(chǎn)科、新生兒、神經(jīng)發(fā)育和行為結(jié)果上沒(méi)有嚴(yán)重的不良反應(yīng)。以上研究的規(guī)模太小，不能提供足夠的關(guān)于AOA安全性的科學(xué)證據(jù)，因此， AOA 仍不應(yīng)被視為 ICSI 受精失敗的常規(guī)治療。此外，ICSI-AOA 并非對(duì)所有疑似卵母細(xì)胞激活缺陷的患者都有益，因此在向一對(duì)夫婦建議 AOA 之前，應(yīng)考慮受精史。