[科普中國]-細(xì)菌菌落總數(shù)

簡介

菌落是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長繁殖而形成的能被肉眼識別的生長物，它是由數(shù)以萬計(jì)相同的細(xì)菌集合而成。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度，與培養(yǎng)基混合，在一定培養(yǎng)條件下，每個能夠生長繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。

菌落總數(shù)測定是用來判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評價。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。

我國現(xiàn)行《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749--2006）規(guī)定：細(xì)菌菌落總數(shù)在1 mL自來水中不得超過100個。細(xì)菌種類很多，有各自的生理特性，必須用適合它們生長的培養(yǎng)基才能將它們培養(yǎng)出來。然而，在實(shí)際工作中卻不易做到，所以通常用一種適合大多數(shù)細(xì)菌生長的培養(yǎng)基培養(yǎng)腐生性細(xì)菌，以它的菌落總數(shù)表明有機(jī)物污染程度。水中細(xì)菌總數(shù)與水體受有機(jī)污染的程度成正相關(guān)。因此細(xì)菌總數(shù)常作為評價水體污染程度的一個重要指標(biāo)。細(xì)菌總數(shù)越大，說明水體被污染得越嚴(yán)重。1

儀器和材料（1） 錐形瓶（500 mL）、試管（18 mm×180 mm）、移液管1 mL 2支及10 mL 1支、培養(yǎng)皿（直徑90 mm）、接種環(huán)、試管架、酒精燈

（2） 自來水（或受糞便污染的河、湖水）400 mL

（3） 無菌水、蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、瓊脂

（4） 1 mol/L NaOH、1 mol/L HCI、精密pH試紙6.4～8.4

水樣的采集和保存采集水樣的器具必須事前滅菌。

(1) 自來水水樣的采集先沖洗水龍頭，用酒精燈灼燒水龍頭，放水5～10 min，在酒精燈旁打開水樣瓶蓋（或棉花塞），取所需的水量后蓋上瓶蓋（或棉塞），迅速送回實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)氯處理的水中含余氯，會減少水中細(xì)菌的數(shù)目，采樣瓶在滅菌前加入硫代硫酸鈉，以便取樣時消除氯的作用。硫代硫酸鈉的用量視采樣瓶的大小而定。若是500 mL的采樣瓶，加入1.5%的硫代硫酸鈉溶液1.5 mL（可消除余氯量為2 mg/L的450 mL水樣中全部氯量）。

（2） 河湖、井水、海水的采集要用特制的采樣器，采樣器是一金屬框，內(nèi)裝玻璃瓶，其底部裝有重沉墜，可按需要墜入一定深度。瓶蓋上系有繩索，拉起繩索，即可打開瓶蓋，松開繩索瓶蓋即自行塞好瓶口。水樣采集后，將水樣瓶取出，若是測定好氧微生物，應(yīng)立即改換無菌棉花塞。

（3） 水樣的處置水樣采取后，迅速送回實(shí)驗(yàn)室立即檢驗(yàn)，若來不及檢驗(yàn)放在4℃冰箱內(nèi)保存。若缺乏低溫保存條件，應(yīng)在報(bào)告中注明水樣采集與檢驗(yàn)相隔的時間。較清潔的水可在12 h以內(nèi)檢驗(yàn)，污水要在6 h內(nèi)結(jié)束檢驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作方法自來水以無菌操作方法，用無菌移液管吸取1 mL充分混勻的水樣注入無菌培養(yǎng)皿中，傾注入已融化并冷卻至50 ℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平放于桌上迅速旋搖培養(yǎng)皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻，冷凝后成平板。每個水樣倒三個平板。另取一個無菌培養(yǎng)皿倒入培養(yǎng)基冷凝成平板作空白對照。將以上所有平板倒置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，計(jì)菌落數(shù)。算出三個平板上長的菌落總數(shù)的平均值即為1 mL水樣中的細(xì)菌總數(shù)。

地表水① 稀釋水樣在無菌操作條件下，以10倍稀釋法稀釋水樣，視水體污染程度定稀釋倍數(shù)。取在平板上能長出30～300個菌落的該種水樣的稀釋倍數(shù)。

② 接種用無菌移液管吸取三個適宜濃度的稀釋液1 mL（或0.5 mL）加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再倒培養(yǎng)基，冷凝后倒置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)。

③ 計(jì)菌落數(shù)將培養(yǎng)24 h的平板取出計(jì)菌落數(shù)。

菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法用肉眼觀察，計(jì)平板上的細(xì)菌菌落數(shù)，也可用放大鏡和菌落計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。記下同一濃度的三個平板的菌落總數(shù)，計(jì)算平均值，再乘以稀釋倍數(shù)即1 mL水樣中的細(xì)菌菌落總數(shù)。各種不同情況的計(jì)算方法如下：

① 首先選擇平均菌落數(shù)在30～300進(jìn)行計(jì)算，當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落符合此范圍時，則以該平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

② 若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均在30～300，則按兩者之菌落總數(shù)之比值來決定，若其比值小于2應(yīng)報(bào)告兩者之平均數(shù)，若大于2則報(bào)告其中較小的菌落總數(shù)。

③ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

④ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

⑤ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

⑥ 在求同一稀釋度的平均數(shù)時，若其中一個平板上有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落約為平板的一半，而另一半平板上菌落數(shù)分布很均勻，則可按半平板上的菌落計(jì)數(shù)，然后乘以2作為整個平板的菌落數(shù)。

⑦ 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的位數(shù)，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，可用10的指數(shù)來表示。在報(bào)告菌落數(shù)為“無法計(jì)數(shù)”時，應(yīng)注明水樣的稀釋倍數(shù)。2