口蹄疫是由口蹄疫病毒 (foot-and-mouth disease virus, FMDV) 引起的, 發(fā)生于牛、羊、豬等偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織將口蹄疫列為動物A類烈性傳染病, 嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的健康發(fā)展以及相關(guān)產(chǎn)品的對外貿(mào)易, 對國家的政治、經(jīng)濟具有深遠的影響。1
簡介口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、接觸性傳染病,最易感染的動物是黃牛、水牛、豬、駱駝、羊、鹿等;黃羊、麝、野豬、野牛等野生動物也易感染此病。本病以牛最易感,羊的感染率低??谔阋咴趤喼蕖⒎侵藓椭袞|以及南美均有流行,在非流行區(qū)也有散發(fā)病例。
口蹄疫發(fā)病后一般不致死,但會使病獸的口、蹄部出現(xiàn)大量水皰,高燒不退,使實際畜產(chǎn)量銳減。另外,有個別口蹄疫病毒的變種可傳染給人。因此,每次爆發(fā)后只能屠宰和集體焚毀染病牲畜以絕后患。由于口蹄疫傳播迅速、難于防治、補救措施少,被稱為畜牧業(yè)的“頭號殺手”。
病因病毒簡介口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亞洲1型)7個血清型。各型之間幾乎沒有免疫保護力,感染了一型口蹄疫的動物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發(fā)病。
FMDV屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)口瘡病毒屬(Aphthovirus),是偶蹄類動物高度傳染性疾?。谔阋撸┑牟≡T诓《镜闹行臑橐粭l單鏈的正鏈RNA,由大約8000個堿基組成,是感染和遺傳的基礎(chǔ);周圍包裹著蛋白質(zhì)決定了病毒的抗原性、免疫性和血清學(xué)反應(yīng)能力;
病毒外殼為對稱的20面體。
FMDV的免疫是依賴T細胞的B細胞應(yīng)答,疫苗接種主要誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生。
口蹄疫病毒致病分子機制FMDV可以與宿主細胞表面的受體分子結(jié)合, 通過胞吞作用進入細胞, 在細胞質(zhì)內(nèi)復(fù)制和增殖, 通常在感染4h~6h后可生成新的感染性病毒粒子。病毒感染的第一步是受體的特異性識別, 研究證實, 整聯(lián)蛋白和硫酸乙酰肝素是FMDV的受體.體外實驗表明, 整聯(lián)蛋白αVβ1、αVβ3、αVβ5、αVβ6、αVβ8可以識別FMDV衣殼蛋白VP1的RGD基序, 其中αVβ6只存在于上皮細胞中, 相比于其他受體, 病毒在體內(nèi)更易于與其結(jié)合。然而, 在FMDV自然感染過程中, 何種整聯(lián)蛋白發(fā)揮關(guān)鍵作用及整聯(lián)蛋白間的協(xié)同功能尚不清楚.硫酸乙酰肝素是體外培養(yǎng)時FMDV利用的受體, 最初被認為是某些O型FMDV進入細胞的受體, 后來發(fā)現(xiàn)A、C、Asia1和SAT-1等其他血清型病毒也能以硫酸乙酰肝素為細胞受體。.最新研究發(fā)現(xiàn), Jumonji C-domain containing protein 6 (JMJD6) 為磷脂酰絲氨酸受體, 具有精氨酸脫甲基酶活性的同時, 可以作為FMDV的替代受體.Lawrence等研究證實, FMDV可以利用JMJD6在不表達整合素和硫酸乙酰肝素的CHO677細胞內(nèi)增殖。2
危害患口蹄疫的動物會出現(xiàn)發(fā)熱、跛行和在皮膚與皮膚黏膜上出現(xiàn)泡狀斑疹等癥狀。
病毒量以在病畜的內(nèi)唇、舌面水泡或糜爛處,在蹄趾間、蹄上皮部水皰或爛斑處以及乳房處水泡最多;其次在流涎、乳汁、糞、尿及呼出的氣體中也會有病毒排出。
惡性口蹄疫還會導(dǎo)致病畜心臟麻痹并迅速死亡。
人一旦受到口蹄疫病毒傳染,經(jīng)過2-18天的潛伏期后突然發(fā)病,表現(xiàn)為發(fā)燒,口腔干熱,唇、齒齦、舌邊、頰部、咽部潮紅,出現(xiàn)水泡(手指尖、手掌、腳趾),同時伴有頭痛、惡心、嘔吐或腹瀉?;颊咴跀?shù)天后痊愈,愈后良好。但有時可并發(fā)心肌炎。患者對人基本無傳染性,但可把病毒傳染給牲畜,再度引起畜間口蹄疫流行。
病畜和帶毒畜是主要的傳染源,它們既能通過直接接觸傳染,又能通過間接接觸傳染(例如分泌物、排泄物、畜產(chǎn)品、污染的空氣、飼料等)傳給易感動物。
口蹄疫的主要傳播途徑是消化道和呼吸道、損傷的皮膚、黏膜以及完整皮膚(如乳房皮膚)、黏膜(眼結(jié)膜)。另外還可通過空氣,也可以通過尿、奶、精液和唾液等途徑傳播。
我國對口蹄疫的防治,預(yù)防主要通過疫苗注射接種,發(fā)生口蹄疫的則捕殺。
歷史沿革早在17-19世紀(jì),德國、法國、瑞士、意大利、奧地利已有口蹄疫的流行記載。歷史上,1951-1952年在英法爆發(fā)的口蹄疫,造成的損失竟高達1.43億英鎊;1967年英國口蹄疫大爆發(fā)導(dǎo)致40萬頭牛被屠宰,損失1.5億英鎊。英、法國等國家爆發(fā)口蹄疫后,嚴(yán)重影響到了豬肉的售價。而大量宰殺牲畜后,需要飼養(yǎng)的牲畜已所剩無幾,市場對動物飼料的需求大減,造成玉蜀黍和大豆等動物飼料的價格下跌。
國際上英美等發(fā)達國家都已全面消滅了口蹄疫,在發(fā)展中國家中,中國也走在牲畜防疫的前列。復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院、上海農(nóng)科院畜牧所、浙江農(nóng)科院病毒所和中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)所,經(jīng)過18年潛心攻關(guān),已成功研制出抗口蹄疫基因工程疫苗---“抗豬O型口蹄疫基因工程疫苗”。中國科學(xué)院上海植物生理生態(tài)研究所科技人員,利用煙草病毒制成一種高安全性新型醫(yī)用疫苗,這種疫苗對口蹄疫病毒有特效。
引發(fā)原因FMDV是偶蹄類動物高度傳染性疾病--口蹄疫的病原,由一條單鏈正鏈RNA和包裹于周圍的蛋白質(zhì)組成,蛋白質(zhì)決定了病毒的抗原性、免疫性和血清學(xué)反應(yīng)能力;
病毒外殼為對稱的20面體。
FMDV在病畜的水泡皮內(nèi)和淋巴液中含毒量最高。在發(fā)熱期間血液內(nèi)含毒量最多,奶、尿、口涎、淚和糞便中都含有FMDV。不過,F(xiàn)MDV也有較大的弱點:耐熱性差,所以夏季很少爆發(fā),而病獸的肉只要加熱超過 100℃也可將病毒全部殺死
。
癥狀患口蹄疫的動物會出現(xiàn)發(fā)熱、跛行和在皮膚與皮膚黏膜上出現(xiàn)泡狀斑疹等癥狀。惡性口蹄疫還會導(dǎo)致病畜心臟麻痹并迅速死亡。
排病毒量:在病畜的內(nèi)唇、舌面水皰或糜爛處,在蹄趾間、蹄上皮部水皰或爛斑處以及乳房處水皰最多;其次流涎、乳汁、糞、尿及呼出的氣體中也會有病毒排出。
人一旦受到口蹄疫病毒傳染,經(jīng)過2-18天的潛伏期后突然發(fā)病,表現(xiàn)為發(fā)燒,口腔干熱,唇、齒齦、舌邊、頰部、咽部潮紅,出現(xiàn)水皰(手指尖、手掌、腳趾),但可把病毒傳染給牲畜動物,再度引起畜間口蹄疫流行。
傳染途徑口蹄疫傳染途徑多、速度快。發(fā)病或處于潛伏期的動物是主要的傳染源。病毒可通過空氣、灰塵、病畜的水皰、唾液、乳汁、糞便、尿液、精液等分泌物和排泄物,以及被污染的飼料、褥草以及接觸過病畜的人員的衣物傳播。口蹄疫通過空氣傳播時,病毒能隨風(fēng)散播到50-100公里以外的地方。牛、羊、豬等高易感動物,感染發(fā)病率幾乎為100%。一般來說,成年動物患口蹄疫的死亡率在5%-20%之間,幼畜的死亡率50%-80%。口蹄疫病毒血清類型多,易變異。已發(fā)現(xiàn)的口蹄疫病毒有A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3和ASIA1等7個血清型。各型的抗原不同,不能相互免疫。1
疫苗研究疫苗接種是特異性預(yù)防FMD的可靠和有效手段,安全有效的疫苗是成功地預(yù)防、控制乃至最終消滅FMD的先決條件。FMD弱毒疫苗和滅活疫苗等常規(guī)疫苗都具有良好的免疫原性,在預(yù)防和控制FMD的過程中發(fā)揮著重要作用,但由于病毒毒力返強、病毒滅活不徹底、活病毒逃逸加工廠等不安全因素,世界上一些地區(qū)FMD的暴發(fā)似乎與滅活疫苗中殘存的活病毒有關(guān),促使人們尋求一種更加安全有效的FMD疫苗。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,F(xiàn)MDV基因工程疫苗如亞單位疫苗、可飼疫苗、合成肽疫苗、蛋白質(zhì)載體疫苗、基因缺失疫苗、活載體疫苗、核酸疫苗等不斷涌現(xiàn)。
亞單位疫苗
基因工程亞單位疫苗是指采用基因工程手段制備病原體亞單位成分,由于亞單位疫苗只含有病原體的一部分,不會引起病原體所導(dǎo)致的動物發(fā)病,在安全性方面大大提高。
FMDV基因工程亞單位疫苗主要是利用各種表達系統(tǒng)表達VP1蛋白,制成疫苗。Kupper等(1981)克隆了FMDVVP1基因,將其插入到原核表達載體PL啟動子的下游,實現(xiàn)VP1基因的原核表達,并通過間接ELISA和放射免疫試驗證實了其表達產(chǎn)物具有抗原性,從而為FMDV基因工程亞單位疫苗的研制提供了理論依據(jù)。同年Kield用大腸桿菌表達的A型FMDVVP1蛋白免疫豬和牛,都可誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生,用高濃的VP1蛋白或重復(fù)接種牛,可使牛抵抗FMDV強毒的攻擊。Morgan證實:用A12-32二聚體多次接種豬,豬也可產(chǎn)生高水平的中和抗體,可以保護豬免受強毒的攻擊,但是該技術(shù)不適合O型FMDV。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)FMDV結(jié)構(gòu)基因和非結(jié)構(gòu)基因2A、3C串聯(lián)起來表達,可以產(chǎn)生76S的類病毒粒子,提純該病毒粒子,用來免疫動物,其免疫效果類似于全病毒,可產(chǎn)生高水平的中和抗體,能抵抗強毒的攻擊,并徹底解決了FMDV常規(guī)疫苗散毒的危險,顯示其良好的年個月度年個前景。除此以外,酵母和桿狀病毒系統(tǒng)也用來表達VP1蛋白,解決VP1蛋白在原核表達系統(tǒng)中不被修飾加工等問題,以期提高其免疫原性。
可飼疫苗
可飼(食)疫苗即利用膿桿菌或基因槍等技術(shù),將免疫原性基因?qū)胫仓曛?,獲得表達免疫原性蛋白的植株。
FMD轉(zhuǎn)基因植物可飼疫苗是研究較早,并且效果較好的例子之一。早在1998年,Carrillo等用FMDV的主要保護性抗原基因VP1獲得了轉(zhuǎn)基因擬南芥,用葉浸提物免疫小鼠,可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體,所有免疫的小鼠都能抵抗FMDV強毒半數(shù)致死量的攻擊,這是有關(guān)轉(zhuǎn)基因植物表達的病毒抗原使免疫動物全部獲得保護的首篇報道,而且一個免疫劑量僅為25-50mg葉片。1999年Wigdorovitta等又利用苜蓿作為受體材料,成功獲得了轉(zhuǎn)基因苜蓿,以15-20mg劑量免疫小鼠,免疫鼠能100%抵抗致死量強毒的攻擊。Carrillo等又以馬鈴薯作為受體材料,成功獲得了表達VP1的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯,動物實驗證實免疫鼠也能抵抗強毒的。FMDV轉(zhuǎn)基因植物可飼疫苗的研究成功,將為牛、羊等草食動物FMD的防治帶來光明的前景。
合成肽苗
合成肽苗即用根據(jù)免疫抗原表位的氨基酸序列合成的抗原決定基小肽制作的疫苗。一般是從蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)并結(jié)合單克隆抗體的分析,推導(dǎo)出蛋白質(zhì)免疫主要抗原表位的氨基酸順序,然后合成或基因工程表達這一段肽作為抗原。
Dimarch用合成O1K病毒VP1141-158和200-213片段氨基酸組成的40個氨基酸肽(半胱氨酸-半胱氨酸-200-213-脯氨酸-脯氨酸-絲氨酸-141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸),在其中間加上兩個脯氨酸和一個絲氨酸,使多肽折成立體構(gòu)型,達到提高了單段肽(141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸)在豚鼠中的應(yīng)答水平,并提出了N-末端氨基酸(半胱氨酸-半胱氨酸)在提高保護應(yīng)答的重要性。Brown等用化學(xué)法合成了FMDVVP1基因編碼的140-160及200-213位肽段基因片段,并在大腸桿菌體內(nèi)得到了表達,用其免疫牛、豬等都獲得了較好的免疫力。Doel分別用A、O、C血清型FMDVVP1序列的141-158和200-213肽段組成的40個aa合成肽,用牛和豚鼠進行了試驗,結(jié)果每個肽都產(chǎn)生了特異性高水平抗病毒中和抗體,在豚鼠中O、A型肽可抗各自病毒的攻擊并獲得完全保護,C型較差。
蛋白質(zhì)載體疫苗
FMDV是細胞內(nèi)增殖,其免疫應(yīng)答依賴于T細胞,因而細胞因子免疫性在抗病毒防御方面起著特別重要的作用。鑒于此,人們FMDVB細胞或T細胞抗原表位與發(fā)的蛋白質(zhì)分子基因或與形成類病毒粒子(Viruslikeparticle)的結(jié)構(gòu)基因融合,利用載體基因蛋白或類病毒粒子的抗原提呈作用,刺激T細胞,增殖機體細胞免疫反應(yīng)。Bittle根據(jù)FMDVO1型VP1氨基酸序列,化合合成140-160段氨基酸肽與載體蛋白偶聯(lián),能誘導(dǎo)保護豚鼠的中和抗體。Broekhuijsen在β半乳糖苷酶N-末端連接VP1基因的B細胞和T細胞抗原表位單拷貝或多拷貝分子,用表達的融合蛋白接種豚鼠,能誘導(dǎo)高水平的中和抗體,刺激T細胞,產(chǎn)生細胞免疫應(yīng)答,抵抗強毒的攻擊。同年Clarke利用乙型肝炎病毒核心蛋白能自我包裝成類病毒粒子,將FMDV的B細胞和T細胞抗原表位連接到其蛋白的N-末端,并在痘病毒中表達,其表達的融合N蛋白在豚鼠和豬中都可誘導(dǎo)高水平的中和抗體。Chan將FMDVVP1的141-160aa和200-213aa串聯(lián)起來與豬IG的重鏈基因的末端融合,用其表達產(chǎn)物免疫的豬,可以抵抗50LD50的FMD的攻擊。由于蛋白質(zhì)載體疫苗安全性高,免疫原性好,故具有誘人的應(yīng)用潛力。
基因缺失疫苗
運用基因工程手段克隆FMDV全長cDNA,構(gòu)建感染性克隆,在DNA水平上來RNA,通過缺失與病毒力相關(guān)的基因,減弱其毒力但不喪失其免疫原性。
FMDV與Mengo病毒同屬小RNA病毒,人們已通過DNA重組技術(shù),將Mengo病毒polly(C)片段縮短,構(gòu)成突變體,這種突變體對小鼠無害,而且在小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生高水平的抗體,保護小鼠免受強毒的攻擊,因而研究人員試圖借鑒Mengo病毒的經(jīng)驗,F(xiàn)MDVpoly(C)片段縮短,雖然縮短了poly(C)片段的FMDV突變體的毒力沒有減弱,但這給人們某種啟發(fā),對FMDV基因組特定位點的缺失,極有可能構(gòu)建FMDV弱毒株。
X射線晶體分析發(fā)現(xiàn),F(xiàn)MDV具有一定立體構(gòu)象,其表面由VP1-VP3組成,在VP1的一個高度可變區(qū)域內(nèi),有一高度保守的β環(huán)狀(G-H環(huán))氨基酸序列暴露于病毒粒子的表面,其中包含精氨酸-苷氨酸-天門冬氨酸(RGD)序列,構(gòu)成病毒的細胞吸附位點。Ochoa等人研究FMDVVP1基因片段的主要抗原位點G-H環(huán)合成肽晶體結(jié)構(gòu)時發(fā)現(xiàn),針對VP1單抗可以產(chǎn)生一定程序的病毒凝集和很強的抑制病毒與細胞吸附作用。Acharya等也發(fā)現(xiàn)含有RGD序列的感染性的cDNA克隆,制備RGD缺失或突變的病毒粒子就成為可能。Mason通過取代病毒RGD序列內(nèi)的氨基酸構(gòu)建FMDV突變株,使病毒不能吸附和感染細胞。以上的研究均證實RGD序列是病毒吸附宿主細胞所必需的。Mckenna等用SGSNPGSL序列取代野生型SGSGVRGDFGSL的RGD編碼序列,構(gòu)建了RGD缺失病毒。這種缺失RGD序列的病毒粒子不吸附和感染細胞。利用該缺失病毒進行小鼠和豬的動物試驗發(fā)現(xiàn),野生型病毒對照組出現(xiàn)典型的FMD癥狀,試驗組無任何癥狀。通過免疫沉淀監(jiān)測了這些動物在接種28d后的血樣,其中對照組顯示很強的結(jié)構(gòu)蛋白活性,沒有測到非結(jié)構(gòu)蛋白活性,證明了野生病毒在動物中能復(fù)制,而所構(gòu)建的病毒不能復(fù)制。用海福特牛對這種病毒所做的油作比較,證明在產(chǎn)生血清中和抗體、刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答、動物保護等方面與滅活疫苗一致,有些優(yōu)于滅活疫苗。
活載體疫苗
利用基因操作技術(shù)將FMDV的保護性基因(VP1或P1)插入到另一種病毒基因組中的某些部位,使之高效表達重組蛋白。由于外源性木的基因VP1或P1已成為載體的一部分,并隨著載體病毒增殖而不停地表達,因而這種活載體疫苗在機體不但不能產(chǎn)生針對載體的抗體,而且可以產(chǎn)生針對FMDV的抗體,從而達到“一針防兩病”的目的。另外,針對FMDV多血清型,而且型間無交叉保護作用,因而可將不同型FMDVVP1或P1基因插入到同一病毒活載體中,從而組成多價基因工程疫苗來預(yù)防、控制FMD及其他相關(guān)疾病。常用的病毒載體主要有痘病毒,腺病毒、皰疹病毒等。Sanz-Parra等構(gòu)建表達FMDVVP1和VP1基因的重組痘病毒,用該重組病毒接種豚鼠,產(chǎn)生針對FMDV的B細胞和T細胞的免疫反應(yīng),2000年,BerinsteinA等構(gòu)建了表達FMDVC3Arg85毒株的P1基因重組痘病毒,用該重組痘病毒接種Balb/c小鼠,用ELISA檢測出高效價的抗FMDV抗體,同時能保護同源病毒強毒的攻擊;GregoryA等,用表達FMDV結(jié)構(gòu)蛋白腺病毒型免疫豬,4周后用相同劑量加強免疫一次,產(chǎn)生高水平的FMDV中和抗體,5/6免疫豬得到了FMDV結(jié)構(gòu)蛋白的VP1多肽,用該重組病毒接種牛誘導(dǎo)高水平的抗FMDV抗體。偽狂犬病病毒與牛傳染性鼻氣管炎病毒屬于皰疹病毒,基因組約150kb,含有許多病毒增殖和復(fù)制所非必需的基因,能容納的外源基因多,是一種很好的病毒載體。Ziji等成功地將豬瘟病毒膜蛋白E1基因插入PRV738株gC基因中得到表達,制成的疫苗使免疫豬獲得了較好的免疫力,并可抵抗PRV強毒和豬瘟ngdu的攻擊。除病毒活載體疫苗外,菌體也用來作為載體,已有人將FMDVVP1的部分抗原肽在菌體系統(tǒng)中嵌合表達。
核酸疫苗
核酸疫苗又稱基因疫苗,是將編碼病原體免疫保護性抗原蛋白基因置于真表達元件的控制下,并將其導(dǎo)入動物機體內(nèi),通過宿主細胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)合成抗原蛋白,從而誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對抗原蛋白的免疫應(yīng)答。由于FMDV血清型多,各型間無交叉保護性,這給FMD的仿制帶來巨大的困難。90年代,隨著基因免疫概念的問世及完善,為FMDV免疫帶來契機。Benvenisti將FMDV完整的結(jié)構(gòu)基因P1和非結(jié)構(gòu)基因2A、3CD串聯(lián)起來,同時加入腦心肌炎病毒(EMCV)內(nèi)部核糖體進入(IRES),并通過免疫熒光和免疫斑點技術(shù)檢測到豬皮膚中,部分豬獲得抵抗FMDV強毒的攻擊。Shieh未了克服亞單位疫苗不能產(chǎn)生持久的免疫保護,通過基因免疫和亞單位疫苗聯(lián)合免疫來增強其免疫效果,首先用含有FMDV主要免疫原性VP1的質(zhì)粒免疫鼠,接下來VP1多肽偶合物(P29-KLH)刺激,免疫的鼠產(chǎn)生高效價的抗體,并具有中和FMDV活性。
總之,理想的疫苗必須安全、有效、同時還應(yīng)具備價廉、易于推廣等優(yōu)點。雖然FMDV滅活疫苗具有良好的免疫原性,但潛在的不安全性影響其使用;另外,由于滅活疫苗制備成本高,價格昂貴,限制了該疫苗的推廣。基因疫苗經(jīng)驗有安全性高,同時可以根據(jù)需要制備同一病毒多哥成分或多價病毒疫苗,大幅度節(jié)約生產(chǎn)成本等優(yōu)點,因此,F(xiàn)MDV記憶內(nèi)工程疫苗是未來的發(fā)展方向。
防治動物患口蹄疫會影響使役,減少產(chǎn)奶量,一般采用宰殺并銷毀尸體進行處理,給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重損失。國際獸疫局將口蹄疫列為“A類動物傳染病名單”中的首位。世界上許多國家把口蹄疫列為最重要的動物檢疫對象,中國把它列為“進境動物檢疫一類傳染病”??谔阋吆苌俑腥救祟?,但人類接觸或攝入污染的畜產(chǎn)品后,口蹄疫病毒會通過受傷的皮膚和口腔黏膜侵入人體。人口蹄疫的特征是突然發(fā)熱,口、咽、掌等部位出現(xiàn)大而清亮的水皰,沒有有效的治療辦法,這些癥狀經(jīng)2-3周后可自然恢復(fù),不留疤痕。因此,對人體健康的危害不大。
有效防治豬口蹄疫的有效措施
做好日常預(yù)防工作
減少豬口蹄疫發(fā)生的關(guān)鍵在于預(yù)防,主要應(yīng)采取以下措施:
1. 消毒。消毒是日常預(yù)防工作的重點,選擇口蹄疫敏感消毒劑,在多發(fā)季節(jié)要每天利用消毒劑進行1 次消毒,其他時間段一個星期消毒1-2 次。消毒范圍包括豬場大門、豬圈門口、豬蹄等,最好在豬圈門口設(shè)置消毒池,便于消毒。
2. 口蹄疫接種。相關(guān)部門要加強豬口蹄疫疫苗接種宣傳,并指導(dǎo)養(yǎng)殖戶選擇正確的接種疫苗。具體來說要做好以下三點:第一,對于疫區(qū)來說,可采取自制的康復(fù)血清對小豬接種,預(yù)防小豬因突發(fā)急性心肌炎死亡。第二,對于規(guī)?;B(yǎng)殖廠來說,要采取疫苗注射、消毒、病豬及時隔離等措施,特別是在高發(fā)季節(jié)。一旦發(fā)生口蹄疫,則要立即隔離病豬,并撲殺病情嚴(yán)重、傳染性強的豬,并注射康復(fù)血清。第三,嚴(yán)格按照免疫程序執(zhí)行。根據(jù)豬口蹄疫發(fā)病特點、病理、癥狀等制定合理的免疫程序并嚴(yán)格執(zhí)行。一般來說種母豬1 年要免疫2~3 次,且配種前必須免疫1 次;對于初產(chǎn)母豬來說,配種期間要免疫2 次,且2 次免疫間相隔1 個月左右。對于小豬來說,在其出生55~65d 之間,要進行第1 次免疫,隨后25~30d 內(nèi)進行第二次免疫。第四,選擇高效、正確的疫苗。可采取合成肽疫苗,且接種疫苗時要輔以黃芪多糖,既可以保護豬,減少不良反應(yīng),而且可以提高免疫效果
治療對策
對癥治療,促進創(chuàng)口愈合。根據(jù)病豬不同臨床表現(xiàn)采取針對性的治療方法。對于臨床癥狀無特異性、納差的病豬來說,采取天行健的口蹄一針靈、黃芪多糖等治療,治療1天。且在飼料或水中適當(dāng)添加維生素C,補充營養(yǎng)。對于乳房、豬蹄水皰明顯的病豬來說,采取黃芪多糖、阿莫西林及恩諾沙星聯(lián)合治療,1 次/d,治療3d。同時用碘甘油涂抹創(chuàng)口,高錳酸鉀治療口腔內(nèi)潰瘍等。對于康復(fù)期的病豬來說,要連續(xù)給予阿莫西林治療7~10d。此外,口蹄疫發(fā)病期間,要用碘制劑、過氧乙酸等合理消毒,1 次/d[4]。同時火堿沖洗空豬圈及病死豬圈,其他地方撒生石灰。年齡、體重不同,治療方案不同。超過25kg的豬只需消炎排毒,如阿莫西林。若疼痛難忍,則給予破痛寧治療,緩解豬疼痛,能站立進食。若病豬出現(xiàn)口腔內(nèi)潰瘍癥狀,則要行高錳酸鉀沖洗口腔。乳房等部位可涂抹青霉素軟膏。不足1kg的豬可能存在急性心肌炎潛在威脅,為此要行康復(fù)血清緊急接種,降低死亡率。
若剛起水泡,水泡沒有破裂,只需用口蹄一針靈注射一次,水泡即可干癟消失。若口鼻、蹄子周圍的水泡已破潰,流血,甚至蹄殼已脫落,需用口蹄一針靈注射兩次,水泡破潰處可結(jié)痂。每瓶100kg體重配合核酸肽連續(xù)注射2天。
發(fā)生口蹄疫的重疫區(qū)
1.盡早注射,越早越好,病毒控制在潛發(fā)期,提高豬群免疫力。
2. 已感染豬群注射兩天,4-5天結(jié)痂脫落后完全恢復(fù)正常,可解除隔離。
3. 對感染后恢復(fù)的弱仔群體,每天加強消毒,五天后注射再加強一針,防止再次感。1
疫區(qū)凈化
若發(fā)生口蹄疫,則要全面、及時的對整個疫區(qū)進行消毒、封鎖、上報等工作,爭取把疫情失降到最低。
結(jié)論
口蹄疫防治工作不單是豬養(yǎng)殖廠的責(zé)任,而是全社會共同參與的項目。要進一步研究接種疫苗,做好豬飼料、種豬管理工作,定期消毒養(yǎng)豬場,有效預(yù)防口蹄疫。一旦發(fā)生口蹄疫,要快速反應(yīng),及時劃定疫區(qū),嚴(yán)格封鎖,采取有效措施控制疫情。
口蹄疫病毒細胞培養(yǎng)技術(shù)研究進展FMDV能在多種動物細胞內(nèi)增殖, 包括原代細胞, 如牛舌上皮細胞、牛甲狀腺細胞、牛胎皮膚-肌肉細胞、仔豬心肌細胞、豬腎細胞、倉鼠腎細胞、牛腎細胞和豚鼠腎細胞等, 還有傳代細胞系, 如犢牛甲狀腺細胞系、豬腎上皮細胞 (PK-15) 、仔豬腎上皮細胞 (IBRS-2) 和倉鼠腎細胞 (BHK-21) 等, FMDV對原代細胞的敏感性雖然較傳代細胞好, 但是其在原代細胞上達到的病毒含量低于傳代細胞系 (原代細胞每0.1g組織含1TCID50~5TCID50, 傳代細胞中可達106TCID50~107.5TCID50) 。此外, 不同型毒株在同一細胞及同一毒株在不同細胞上的生長狀態(tài)有一定的差異。犢牛甲狀腺細胞對FMDV最敏感, 適于感染組織分離增殖病毒。FMDV在牛舌上皮細胞內(nèi)易于生長, 24 h收獲病毒時, 毒價可達106TCID50/mL~108TCID50/mL。IBRS-2細胞系和BHK-21細胞系常用于進行口蹄疫病毒的分離培養(yǎng)??谔阋卟《镜呐囵B(yǎng)技術(shù)主要為貼壁培養(yǎng)技術(shù)和懸浮培養(yǎng)技術(shù), 后者是FMDV大規(guī)模培養(yǎng)的主流模式3
本詞條內(nèi)容貢獻者為:
張磊 - 副教授 - 重慶師范大學(xué)